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中藥化學(xué)輔導(dǎo):植物組織培養(yǎng)及其在中草藥研究中的運(yùn)用

植物組織培養(yǎng)(plant tissue culture)是應(yīng)用無(wú)菌培養(yǎng)的方法培養(yǎng)植物的一個(gè)離體部分,也即是一種將自然環(huán)境中分離出來(lái)的植物細(xì)胞或組織放入含有合成培養(yǎng)基的瓶中,在無(wú)菌條件下使之生長(zhǎng)或發(fā)育的方法。這項(xiàng)工作自動(dòng)控制50年代后期至今巳取得了很大的進(jìn)展,如誘導(dǎo)培養(yǎng)胡蘿卜的體細(xì)胞分化成完整植株,由曼陀羅的花藥培養(yǎng)形成了單倍體的植株。從而證明了植物每個(gè)體細(xì)胞都有形成整體植物的潛在能力,如植物細(xì)胞具有“全能性”,在離體培養(yǎng)的一定條件下能誘導(dǎo)其分化器官和再生成植株。70年代以后有關(guān)植物原生質(zhì)體培養(yǎng)和體細(xì)胞雜交的研究得到了很訣發(fā)展,如煙草、曼陀羅、顛茄、胡蘿卜、油菜等能從其原生質(zhì)體經(jīng)培養(yǎng)再生分化長(zhǎng)成胚或完整的植物,利用原生質(zhì)體融合已經(jīng)能使煙草屬和矮牽牛屬的雜種細(xì)胞增殖分化成雜種植株。
  因此,運(yùn)用組織培養(yǎng)方法可以在比較簡(jiǎn)單易觀(guān)察的條件下研究細(xì)胞、組織或器官的繁殖、生長(zhǎng)和分化,以及各種外界因素對(duì)它們的影響,從而為解決農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和藥物生產(chǎn)中的某些問(wèn)題開(kāi)辟了廣闊的前景,目前已有若干重要成果應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐中,一為營(yíng)養(yǎng)繁殖系的快速繁殖,如以甘蔗為例,原來(lái)每畝要用蔗種 0.5~1噸,用組織培養(yǎng)快速繁殖的幼苗進(jìn)行栽培可節(jié)省大量蔗種。又如貝母繁殖率非常低,而用組織培養(yǎng)分化出的三個(gè)月左右的鱗莖,其大小就相當(dāng)于用種子繁殖二年生的鱗莖,另一為藥物和生物制品的工業(yè)生產(chǎn),藥用植物的有效成分一般都從植物體提得,其產(chǎn)量和質(zhì)量難免要受到植物的遺傳性、生長(zhǎng)條件、收獲時(shí)間及貯藏和運(yùn)輸?shù)纫蛩厮绊,如果能采用?lèi)似培養(yǎng)微生物產(chǎn)生抗菌素的方法生產(chǎn)有效成分,就可克服這些缺點(diǎn),這對(duì)生長(zhǎng)條件要求嚴(yán)格、生長(zhǎng)緩慢、產(chǎn)量低、價(jià)值貴重的植物藥更有意義。如近年來(lái)已大量培養(yǎng)人參組織,并提取有效成分,因此利用組織培養(yǎng)生產(chǎn)藥用成分,探索天然藥物生產(chǎn)工業(yè)化的途徑是當(dāng)前藥物生產(chǎn)的一個(gè)新方向,隨著大規(guī)模人工培養(yǎng)技術(shù)的成功,就有可能用組織培養(yǎng)法來(lái)代替全植物提取有效成分,這項(xiàng)工作將是未來(lái)研究植物藥的中心課題之一。
  一、培養(yǎng)基的組成和配制法
  近年來(lái)用的化學(xué)合成培養(yǎng)基大致由6種成分組成:(1)糖類(lèi),②多種無(wú)機(jī)鹽類(lèi),(3)微量元素,(4)氨基酸、酰胺、嘌呤:(5)維生素;③生長(zhǎng)素。此外,有些培養(yǎng)基還可添加天然的汁液,如椰子汁、酵母提取液、水解酪蛋白、麥芽浸出液等,培養(yǎng)基中如加入0.5~1%的瓊脂即為靜止培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基,否則為懸浮培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基。不同植物材料常需要改變配方,如維持生長(zhǎng)和誘導(dǎo)細(xì)胞分裂和分化的培養(yǎng)基配方就不同,因此配方的種類(lèi)很多,目前以ms (murashige and skoog)培養(yǎng)基配方為最常用的一種基本培養(yǎng)基,它利于一般植物組織和細(xì)胞的快速生長(zhǎng)。
  總之,在進(jìn)行組織培養(yǎng)研究時(shí)應(yīng)根據(jù)研究目的和培養(yǎng)植物的種類(lèi)來(lái)確定培養(yǎng)基的組成,除營(yíng)養(yǎng)、誘導(dǎo)作用外還應(yīng)當(dāng)注意離子平衡和毒性問(wèn)題,如水一般都采用重蒸餾水,無(wú)機(jī)鹽類(lèi)一般都需用化學(xué)純的藥品, ph值可用1n koh(或naoh)溶液和2n hci調(diào)整。有時(shí)可以用普通藥品代替,但須注意這些藥品不僅應(yīng)有營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,還須無(wú)毒。如果在工業(yè)上使用大缸深層培養(yǎng)細(xì)胞或組織生產(chǎn)有效成分和生物制品、應(yīng)用培養(yǎng)基的量將要以噸位計(jì)量時(shí),則采用什么代用品較為經(jīng)濟(jì)實(shí)用更應(yīng)慎重考慮。
  二、培養(yǎng)條件
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  對(duì)大多數(shù)植物組織20~28℃即可滿(mǎn)足生長(zhǎng)所需,其中26~27℃最適合。
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  組織培養(yǎng)通常在散射光線(xiàn)下進(jìn)行。光的影響可導(dǎo)致不同的結(jié)果。有些植物組織在暗處生長(zhǎng)較好,而另一些植物組織在光亮處生長(zhǎng)較好,但由愈傷組織分化成器官時(shí),則每日必須要有一定時(shí)間的光照才能形成芽和根。有些次生物質(zhì)的形成,光是決定三因素。
 。ㄈB透壓:
  滲透壓對(duì)植物組織的生長(zhǎng)和分化很有關(guān)系。在培養(yǎng)基中添加食鹽、蔗糖、甘露醇和乙二醇等物質(zhì)可以調(diào)整滲透壓。通常1~2個(gè)大氣壓可促進(jìn)植物組織生長(zhǎng),2個(gè)大氣壓以上時(shí),出現(xiàn)生長(zhǎng)障礙,6個(gè)大氣壓時(shí)植物組織即無(wú)法生存。
 。ㄋ模┧釅A度:
  一般植物組織生長(zhǎng)的最適宜ph為5~6.5。在培養(yǎng)過(guò)程中ph可發(fā)生變化,加進(jìn)磷酸氫鹽或二氫鹽,可起穩(wěn)定作用。
  (五)通氣:
  懸浮培養(yǎng)中細(xì)胞的旺盛生長(zhǎng)必須有良好的通氣條件。小量懸浮培養(yǎng)時(shí)巨常轉(zhuǎn)動(dòng)或振蕩,可起通氣和攪拌作用。大量培養(yǎng)中可采用專(zhuān)門(mén)的通氣和攪拌裝置。
  三、材料和方法
  從低等的藻類(lèi)到苔蘚、蕨類(lèi)、種子植物等高等植物的各類(lèi)、各部分都可采用作為組織培養(yǎng)的材料,一般裸子植物多采用幼苗、芽、韌皮部細(xì)胞,被子植物采用胚、胚乳、子葉、幼苗、莖尖、根、莖、葉、花藥、花粉、子房和胚珠等各個(gè)部分。